Природа против рака
Кроцетин - это натуральный каротиноид, который получается из цветков Крокуса или плодов Гардении жасминовидной. Более ранние исследования показали, что кроцетин способен уменьшать физическую усталость и улучшает качество сна. А если кроцетин принимать в высоких концентрациях, то он способен защитить сетчатку глаза от повреждения при различных дегенеративных заболеваниях, например диабете.
Новое исследование, опубликованное в марте 2015 года и проведенное кафедрой гинекологии и акушерства Военного госпиталя Вооруженных сил Китая, показало на возможности кроцетина по подавлению провоспалительных цитокинов и уменьшению выработки фермента ЦОГ-2 в раковых клетках шейки матки. Такое действие способно тормозить воспаление, подпитывающее рост злокачественной опухоли. Также кроцетин вполне может быть использован, как противовоспалительное средство.
Исследование (автоматический перевод без адаптации).
Кроцетин подавляет провоспалительные цитокины в Methylcholanthrene-индуцированной модели опухоли у грызунов и ингибирует ЦОГ-2 выражение в раковых клетках шейки матки
Источники информации:
www.ncbi.nlm.nih.gov
www.hindawi.com
Реферат
Эффект кроцетин (с20ч24О'4) на methylcholanthrene- (СМА-) индуцированной матки рак шейки матки у мышей была изучена в настоящей работе. После того, как мыши получали перорально кроцетин, малеинового диальдегида (мда), полиморфно-ядерные клетки (ЗМС), интерлейкин-1β(ил-1β) и фактора некроза опухоли-α (ФНО-α) исследовали методом ИФА или иммуногистохимии. В индуцибельной синтазы оксида азота (iNOS) активации в линии hela клеток анализировали при помощи флуоресцентной микроскопии для света микроскопическом исследовании. СМА мышей выявлено значительное повышение в плазме крови мда, ЗМС, ил-1β, ФНО-α и нитраты уровнях. В то же время уровень мРНК ЦОГ-2 в линии hela клетках был также значительно увеличен. Эти изменения были ослаблены по кроцетин добавок в СМА мышей. Кроцетин добавок в СМА мышей также показали защиту от рака шейки матки. Эти результаты позволяют предположить, что кроцетин может выступать в качестве препараты для химиопрофилактики и противовоспалительное средство.
Введение
Рак шейки матки является вторым наиболее распространенным видом рака среди женщин во всем мире [1]. Несмотря на улучшение знаний этиологии рака шейки матки, агрессивные циторедуктивная хирургия и современные комбинации химиотерапии, произошли небольшие изменения в статистике смертности за последние 30 лет. Убедительных доказательств показал, что большинство видов рака возникают из сайтов хронического раздражения, инфекции и воспаления, укрепляя понятие, что хроническое воспаление является не ослабевает критических для прогрессии опухоли [2]. В микроокружении опухоли очень напоминает воспаление узла, которое является результатом повышения уровней цитокинов, хемокинов, нейтрофилов, эозинофилов, тучных клеток, лимфоцитов и макрофагов как в окружающей строме и внутри самой опухоли [3]. Недавние клинические испытания показали, что длительная противовоспалительная терапия может быть полезной при колоректальном раке [4]. Поэтому Фармакологические препараты эффективны для лечения воспалительных заболеваний, также могут быть использованы в рак шейки матки.
Кроцетин (с20ч24О'4) является одним из основных активные компоненты шафрана, который получают из высушенных клеймо Крокус sativus L., и принадлежит к сем. Предыдущие исследования показали различных фармакологических эффектов этого активного ингредиента без его антиоксидантные, противовоспалительные и противоопухолевые эффекты на некоторых клеточных линиях и животных моделях рака [4–8]. Впрочем, ничего не известно о воздействии кроцетин в канцерогенезе шейки матки. В настоящем исследовании мы исследовали его противовоспалительное воздействие на интерлейкин-1β (ил-1β), фактор некроза опухоли-α (ФНО-α) и PMNs деятельности в methylcholanthrene- (СМА-) индуцированных опухолей шейки матки мышиной модельной системе. Далее, последствия кроцетин на экспрессию циклооксигеназы-2 (ЦОГ-2) в клетках hela были также оценены.
Материал и методы
2.1. Наркотики
Methylcholanthrene (СМА) был приобретен у Сигмы ко., ООО Кроцетин был приобретен у Yiji натуральные продукты Co., ООО, Китай.
2.2. Животные
Данное исследование проводилось в соответствии с руководством по уходу и использованию лабораторных животных. Были приняты меры для минимизации дискомфорта, дистресса и боли животных.
2.3. Опытно-Конструкторское
Женский Куньмин штамм мышей весом 20-22 г были сохранены при комнатной температуре в условиях знакопеременных натуральный светлый/темный фотопериода и имел доступ к стандартной лабораторной продовольствия и пресной воды вволю. Мерфи метод string [9] был применен при индукции опухолей в области шейки матки мышей. Кратко, стерильная двойная хлопковая нить, пропитанная воском, содержащий 600 μг СМА был вставлен в канал шейки матки путем лапаротомии под легкой эфирной анестезией. Сорок восемь из этих мышей были равномерно распределены в 4 группы: СМА-индуцированной группы, СМА и Кроцетин-10 Группа, СМА и Кроцетин-20 группа, и СМА и Кроцетин-40 группы. Остальные 12 нормальных мышей, были использованы в качестве контрольной группы. С тех пор, к 5 группам мышей вводили перорально физраствор, Кроцетин 10 мг/кг, Кроцетин 20 мг/кг, Кроцетин 40 мг/кг и физиологический раствор, соответственно. Кроцетин растворяют в дистиллированной воде и принимают внутрь два раза в день, используя иглу для кормления 35 дней, и контрольной группы получали двойной дистиллированной воды вместо кроцетин.
В конце экспериментального периода животные были постился на ночь (18 ч) и затем приносили в жертву путем декапитации, кровь собирали для центрифугировали при 3000 об / мин в течение 20 мин, и очистить сыворотку отделяли для измерения воспалительных клеток и воспалительных медиаторов. Объемы опухоли и iNOS белка гистохимии определяли.
2.4. Измерение Малеинового Диальдегида (мда)
Мда определяли с помощью тиобарбитуровой кислоты (ТБК) с использованием изготовителя (Нанкин Jiancheng Биоинженерии Института). Общее содержание белка в образцах анализировали с использованием Кумасси синего пробирного (Нанкин Jiancheng Биоинженерии Института).
2.5. Измерение инфильтрации ЗМС
Миелопероксидазы (МПО) активность измеряли для оценки степени ЗМС инфильтрации. Метод анализа активности ГПО было согласно руководство пробирной комплект (в nanjing Jiancheng Биоинженерии ко. ООО, Китай).
2.6. Измерение ил-1β и ФНО-α уровень
Концентрация ил-1β и tnf-α определяли с использованием коммерческого набора elisa (Шанхайский отель Цзиньма в биологических технологий, Инк., Китай), следуя инструкции производителя.
2.7. Оценка iNOS белка Гистохимии
Опухоли были расчленены бесплатно из мягких тканей на конец исследования и собраны на хром гель подкроватью горки. Тканевые срезы фиксировали в 50% ацетоном на фосфатно-солевом буфере в течение 3 минут при комнатной температуре и эндогенная пероксидазная активность была заблокирована на 1,5% ч2О2 в метаноле в течение 15 минут. В iNOS белка определяли с использованием коммерческого набора elisa (Шанхайский отель Цзиньма в биологических технологий, Инк., Китай), следуя инструкции производителя.
2.8. Клеточные Культуры
Клетки hela (рак шейки матки человека линии hela клеточная линия была получена из клеток культуры Центр Шанхая Академия Наук, Китай) велись в чашках Петри при 37°C в питательная среда-модифицированные культуры Орла среде с добавлением 10% эмбриональной телячьей сыворотки и 1% антибиотиков смеси, под увлажненной атмосфере, содержащей 5% углекислого газа. В культуральную среду меняли дважды в неделю. После того, как они достигли их роста, плато, клетки были использованы для инокуляции, путем механического сбора урожая и трансфер в свежей культуральной среде.
2.9. Кроцетин Ингибировал ЦОГ-2 в клетках hela производства
Анализ ЦОГ-2 производства проведен с использованием набора elisa согласно инструкциям производителя (Шанхайский отель Цзиньма в биологических технологий, Инк., Китай). Клетки hela обрабатывали различными концентрациями кроцетин (1, 10, 50, и 100 μмоль/л) в течение 24 ч. Надосадочная жидкость клеточной культуры собирали для измерения концентрации ЦОГ-2. Производство ЦОГ-2 нормировались концентрации белков.
Общую РНК экстрагировали из кроцетин-обработанных и необработанных клетках hela с помощью GenElute Геномной РНК млекопитающих Общая изоляция комплект (Сигма) согласно протоколу производителя. Извлеченные образцы РНК были затем подвергают обратной транскрипции (РТ-ПЦР для анализа экспрессии ЦОГ-2.
2.10. Статистический Анализ
Данные были выражены как среднее значение ± SEM и результаты были проанализированы с помощью дисперсионного анализа с последующим Dunnett это т тест. Р < 0,05 считалось значимым.
Результаты и их обсуждение
Значительный объем свидетельств, поддерживает концепцию, что опухоли могут возникать на объектах инфекции или хронического воспаления [10–12]. Многие патологические расстройства или заболевания, включая рак шейки матки, характеризуются усугубляется активации и поддержании воспалительных путей [13, 14]. В текущем исследовании, мы обнаружили, что СМА-индуцированного канцерогенеза у мышей матки у животных значительно увеличилось циркулирующие концентрации воспалительных цитокинов и фактора некроза опухоли-α (ФНО-α), когда по сравнению с контролем. Это согласуется с предыдущими данными [10–14].
Перекисное повреждение играет важную роль в прогрессировании воспалительного процесса опосредованного заболевания, в частности рак шейки матки. Центральной догмой в хроническое воспаление гипотеза подчеркивает роль АФК, генерируемых фагоцитами, которые вызывают цитотоксичность и мутагенность [15–17]. Таким образом, антиоксидантные эффекты кроцетин были исследованы путем измерения уровня мда. У контрольных животных показали низкие уровни мда, однако уровень мда в СМА группы были достоверно выше (Р < 0.05). Как показано нарис. 1, Мда уровней в кроцетин (40 мг/кг) и кроцетин (20 мг/кг) групп были значительно ниже, чем в СМА группы (Р < 0.01 и Р < 0.05, соотв.). Этот результат находится в согласии с предыдущих докладов [18, 19]. Это говорит о том, что кроцетин может оказывать существенное влияние на ингибирование перекисного окисления липидов и генерацию свободных радикалов.
Связь между опухолевыми клетками и полиморфно-ядерных клеток (PMNs) была продемонстрирована в нескольких типах рака [20, 21]. Однако роль PMNs в прогрессии рака шейки матки не была хорошо изучена в естественных условиях. В данном исследовании PMNs активности был относительно низким в контрольной группе и значительно увеличилась в СМА группы. Лечение с кроцетин 40 мг/кг значительно уменьшается PMNs деятельности (Таблица 1). Лечение с кроцетин 20 мг/кг активность также снижена PMNs. Однако, это не является существенным. PMNs может способствовать вторичное повреждение микрососудов, вызывая окклюзию и высвобождение кислородных радикалов, цитолитической протеиназы, и провоспалительных цитокинов, которые могут индуцировать повреждение нейронов [22, 23]. В настоящем исследовании мы наблюдали дозозависимый ингибирующий эффект кроцетин на PMNs деятельности, что свидетельствует о менее инфильтрации нейтрофилов в очаг сайта.
Главные особенности онкологических заболеваний, связанных с воспалением, включают инфильтрацию лейкоцитов и цитокинов, таких как интерлейкин (ил)-1, ил-6 и фактора некроза опухоли-α (ФНО-α) [24]. Ил-1β показали, чтобы быть активирована во многих раков и наделяет хемостойкость карцином поджелудочной железы [25]. Наши исследования согласуются с этими исследованиями. Рис. 2 показывает, что СМА значительно увеличилась концентрация белка интерлейкина-1β. Кроцетин (40 мг/кг) и кроцетин (20 мг/кг) лечения снижался уровень ил-1β на 34% и 56% по сравнению с СМА группы, соответственно (Р < 0.05). ФНО-α это воспалительный цитокин, который может играть важную роль в прогрессировании поражения шейки матки [26]. ФНО-α измеряли в крови, чтобы оценить, является ли концентрация этого цитокина была системно влияют кроцетин. Кроме того, это помогает выяснить, является ли или не ФНО-α могут быть причастны эффект, который был замечен на миграцию нейтрофилов. Как показано на рис. 3, уровень ФНО-α повышен значительно после индукции опухолей с помощью МКА. Кроцетин (40 мг/кг) подавляли эту реакцию (Р < 0.05). Мы показали в данном исследовании, что администрация кроцетин снизились сывороточные уровни ил-1β и ФНО-α , которые, как известно, чтобы быть получены путем индукции опухолей с помощью МКА. Результаты исследования цитокинов дали нам некоторое представление о механизмах, участвующих в охране кроцетин против рака шейки матки (Таблица 2).
Индуцибельной NOS является индуцированный в ответ на воспалительные-как раздражители и способна устойчивого производства высоких уровней нет, которые преобладают во время воспаления [27]. Чрезмерное или неуместное производство не может повредить ткань через супероксид анион (О2−) [28]. В флуоресцентной микроскопии анализов показали доказательства широко распространенной экспрессии iNOS в клетках опухоли у животных с окклюзией но никаких доказательств iNOS иммунореактивность в управление. Лечение с кроцетин (40 мг/кг) угнетал экспрессию iNOS в клетках костного мозга (Рис. 4).
Согласно предыдущим исследованиям Subbaramaiah и Данненберг, ЦОГ-2 участвует в воспалении и его повышенная сообщалось в различных онкологических заболеваний [29]. В настоящем исследовании, клетки hela были показаны, чтобы выразить высокие уровни ЦОГ-2, которая впоследствии была подавлена на лечение с кроцетин (Рис. 5(а)). Относительно nontreated управления, кроцетин дозозависимому снизилась ЦОГ-2 Производство в рак шейки матки клеток (Рис. 5(б)). Было высказано предположение, что ЦОГ-2 является важной мишенью для препараты для химиопрофилактики эффекты этих агентов. В настоящем исследовании согласуется с этим исследование [30]. Наши наблюдения заставляют нас предположить, что ингибирование ЦОГ-2 производство по кроцетин может подавлять рост и инвазивность карцином шейки матки.
Вывод
Это исследование показало впервые, что кроцетин оказывает противовоспалительное действие за счет подавления уровня ил-1β и ФНО-α , а также PMNs деятельности в СМА-индуцированных опухолей шейки матки мышиной модельной системе. Далее, кроцетин дозозависимому снизилась ЦОГ-2 производства шейки матки в раковые клетки. В целом, кроцетин продемонстрировали мощный в пробирке и в естественных условиях с противовоспалительной активностью. Это обеспечило поддержку для потенциального использования кроцетин как препараты для химиопрофилактики и противовоспалительное средство.
Оставить комментарий